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从动物血液提取SOD的工艺流程及技术 SOD(过氧化物岐化酶,Superoxide dismutase)存在于动物、植物及微生物中的金属酶,主要分为以下几种类型(如表)。 表SOD的分类及存在类 SOD用于延缓人体衰老,防止色素沉着,并治疗慢性多发性关节炎等症,也被广泛地应用于生产日用化工品,如SOD化妆护肤品,对抗衰老、去除脸面雀斑等有明显的效果。随着日用化工产品的发展及SOD在临床上的应用,SOD的需求量越来越大。 我国动物血源丰富,牛血、猪血的价格较低,生产SOD工艺简单。所以,用牛血、猪血来提取SOD具有较大的发展前途。现介绍用牛血、猪血来提取SOD的方法。 1、工艺流程 2、技术操作要点 (1)分离: 新鲜动物血(牛血或猪血)收集后,用纱布滤出血液,以除去血液中的杂毛及其它异物,然后加入柠檬酸钠(一般10kg血液中加380mg柠檬酸钠),充分搅拌均匀后以3000转/分的速度(以下如同)离心15~20分钟,收集血球,血浆可用于凝血酶的提取。 (2)去除血红蛋白: 用0.9%氯化钠溶液离心洗涤已收集的血球三次,每次氯化钠溶液用量为血球体积的2倍为宜。往已离心洗涤的血球中加入等体积的去离子水(或蒸馏水),在温度2℃左右的条件下剧烈搅拌30~40分钟,并在同温下放置24小时左右。因为牛血SOD对热较稳定,但猪血SOD对热敏感,所以在分离或提取整个过程中温度控制在0~4℃,时间不要超过3天。若因其它原因,不能及时处理时,可以冷冻保存溶血溶液,并不影响其SOD的活力。 (3)萃取: 往溶血溶液中分别缓慢加入溶血的血球0.25~0.3倍体积的95%冷乙醇和0.15~0.2倍体积的冷氯仿,充分搅拌30分钟,静置30分钟,然后进行离心分离,收集上清液。此时应注意有机溶剂的适当比例,才能有效地分离去除蛋白质等杂质,同时必须控制温度在2℃左右(不要超过5℃),才能达到最佳分离效果。 (4)沉淀: 向上述上清液中加入1~2倍体积的冷丙酮,充分搅拌均匀,此时可产生大量白色沉淀,静置30分钟,然后进行离心分离,收集沉淀物。再用1.5倍的冷丙酮洗涤沉淀物,在温度2℃的条件下静置24小时左右。再进行离心分离,收集沉淀物。并把上层丙酮液合并在一起,回收丙酮,此丙酮可以重新使用。 (5)热变: 把pH值为7.6~7.8,浓度为2.5微摩尔/升的K2HPO4——KH2PO4缓冲溶液加入到上述沉淀中,并在温度60℃下搅拌30分钟,然后迅速冷却到20℃,离心分离收集上清液。因为牛血SOD在pH值5