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加入 K 2 HPO4 3H 2O(43g / 100ml) 提取新鲜动物血液加入体积1/3的 转移至分液漏斗震荡后静置15min 将透析完全的粗酶液离心去沉淀 收集上层液,4000r/min离心20min 柠檬酸钠抗凝剂,4000r/min离心 用聚乙二醇进行适当浓缩 取上清液。 20min。收集红细胞。 装填DEAE Sephadex A-50层析 加入0.75体积冷丙酮,4000r/min 向红细胞中加入等体积的 6% 柱。装填平衡完毕后准备pH7.6 离心20min收集沉淀。 X-100) Triton X-100(曲拉通 2~200mmolPBS,进行梯度洗 充分搅拌20min。 加入少量重蒸水,55℃热处理 脱。 15min,后迅速冰浴至 4℃冰箱中冻融4h。 梯度洗脱的流速在40ml/h 4℃并4000r/min离心 加入0.25体积的乙醇和 收集器转速为6min/管。 20min,弃沉淀。 0.15体积的氯仿搅拌 收集波峰溶液浓缩后干燥 pH7.6透析浓缩 15min后离心取上清液 得到淡蓝绿色产品。